端粒的长短和稳定性不仅决定了细胞寿命，还和肿瘤发生密切相关。因此，维持端粒长度和稳定性的关键酶——端粒酶成为了一种重要的肿瘤标志物。开发细胞内端粒酶的高灵敏检测新方法，在肿瘤的早期诊断和治疗等方面具有重要的临床意义。
近日，MolecularBiomedicine发表研究性文章“Detectionofalternativelengtheningoftelomeresmechanismontumorsections”，探讨了开发新的肿瘤活检ALT检测工具的可能性。该研究开发了基于检测富含C的单链端粒DNA的天然端粒FISH（NativetelomericFISH）方法，结合检测ALT标志物超亮端粒信号（UBS），为肿瘤组织中的ALT诊断提供了一个敏感和强大的工具[1]。本文通讯作者为比利时鲁汶大学的AnabelleDecottignies教授，第一作者为博士研究生Elo?seClaude。
大多数肿瘤细胞通过激活端粒维持机制(telomeremaintenancemechanism,TMM)实现增殖。TMM的激活一般是通过hTERT端粒酶基因表达的去沉默来实现的。而在包括儿科肿瘤在内的一些罕见癌症类型中，一种基于同源重组和非端粒酶依赖的替代机制——端粒选择性延长(AlternativeLengtheningofTelomeres,ALT)常被激活，以维持肿瘤细胞内端粒的稳定性[2]。ALT机制在肿瘤靶向治疗中显示了新前景，而目前仍需开发快速、可靠、高灵敏的适用于肿瘤组织的ALT检测工具。
研究团队首先建立了新的ALT+肿瘤异种移植模型，开发了一种新的LB/ALT+肉瘤细胞系，选择HT/TEL+细胞系作为阴性对照，重新评估了先前一系列肿瘤组织ALT检测方法的效用（图1）。
图1ALTmarkerdetectioninLB/ALT+andHT/TEL+cancercelllines.
随后，团队开发了一种新的检测方法，在细胞水平上验证该法检测ALT的灵敏性和可靠性。此方法基于检测富含C的单链端粒DNA的天然端粒FISH（NativetelomericFISH）,可以检测富含C的单链端粒DNA(ss-TeloC)，而这是ALT+细胞的一个标志[3]。使用该方法对细胞核进行分析，发现至少有45%的LB/ALT+细胞核呈ss-TeloC阳性，而只有1.4%的HT/TEL+细胞核呈ss-TeloC阳性（图2），具有显著性差异。提示NativetelomericFISH方法灵敏度较高，可很好地用于细胞ALT的检测。
图2NativetelomericFISHforsingle-strandedC-richtelomericDNAvisualisationasapotenttoolforALTdetectioninxenograft-derivedtumortissues.
最后，作者将NativetelomericFISH检测应用于儿科肿瘤样本，包括原发、复发或转移的不同阶段的肿瘤切片，结果表明，该方法可以很容易识别出ALT阳性的肿瘤，如神经母细胞瘤和骨肉瘤。其中，TMM通过金标准C-环扩增检测得到确认。这些结果与先前报道的儿科骨肉瘤和神经母细胞瘤中ALT表型的高患病率一致，进一步为NativetelomericFISH在临床肿瘤样本中ALT的检测应用提供了依据。
总之，作者探讨了开发新的肿瘤活检ALT检测工具的可能性，该工具可能与临床生物学相兼容，无论是细胞水平还是在临床标本上，均表明NativetelomericFISH结合UBS检测可很好的用于肿瘤细胞中ALT的检测。但是在未来，需使用NativetelomericFISH方法来筛选更多的肿瘤样本，以确定其在其他肿瘤类型中检测ALT的适用性和稳定性。
参考文献：
[1]ClaudeE,deLhoneuxG,PierreuxCE.etal.Detectionofalternativelengtheningoftelomeresmechanismontumorsections.MolBiomed2,32().