来源：ChemicalBook
背景[1-3]
UMR-细胞是注射放射性同位素磷(32P)诱导产生的可移植性大鼠骨肉瘤克隆建立的细胞系。UMR-细胞对PTH、前列腺素及破骨甾体有响应。UMR-细胞对PTH的响应度比相关细胞株UMR-要高；蛋白激酶C的活化抑制ATP诱导的胞内钙水平的升高。
培养条件：DMEM＋10%FBS＋1%P/S；气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃。
UMR-细胞细胞处理：1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
将0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5mlPBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。
用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
应用[4][5]用于KISS1/GPR54系统对大鼠骨肉瘤UMR-细胞及原位移植瘤模型的作用研究1.构建大鼠骨肉瘤“原位移植-肺转移”模型，为研究KISS1/GPR54系统对大鼠骨肉瘤的影响构建实验平台。
2.检测KISS1/GPR54系统在大鼠骨组织和骨肉瘤模型中的表达。
3.研究KISS1的多肽片段对骨肉瘤UMR-细胞迁移、侵袭能力的影响。
4.构建大鼠KISS1基因重组慢病毒并感染UMR-细胞，获得稳定表达外源性KISS1基因的UMR-细胞。
5.探讨大鼠KISS1基因修饰对于大鼠骨肉瘤的影响及可能机制。
方法1.使用钡剂测定大鼠胫骨骨髓腔容积，向骨髓腔内注射适量的大鼠骨肉瘤UMR-细胞悬液，观察胫骨原位肿瘤生长和肺部转移情况，应用RT-PCR检测碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）在细胞、原位肿瘤和肺转移结节中的表达。
2.采用RT-PCR法和WesternBlot法，从mRNA水平和蛋白水平检测KISS1和GPR54在大鼠骨组织、UMR-细胞、裸鼠模型的原位肿瘤组织中的表达情况。
3.采用50nM、nM、nM三个剂量的Kp-10（Kisspeptin10肽片段）作用于UMR-单细胞层，划痕实验和Transwell实验分别观察细胞迁移和侵袭能力的变化。
4.构建携带大鼠KISS1基因的重组慢病毒并感染UMR-细胞，通过荧光表达法判定感染复数（MultiplicitiesofInfection,MOI），WesternBlot检测感染前后的细胞中KISS1蛋白的表达情况。
5.体外实验：划痕实验和Transwell实验测定转染前后各组细胞的迁移、侵袭能力的变化。WesternBlot检测转染前后各组细胞MMPs，TIMPs的表达变化。体内实验：观察转染前后各组细胞原位模型的肿瘤大小和肺转移结节的数量。#细胞#
参考文献[1]KISS1over-expressionsuppressesmetastasisofpancreaticadenocarcinomainaxenograftmousemodel[J].LaceyR.McNally,DannyR.Welch,BenjaminH.Beck,LewisJ.Stafford,JoshuaW.Long,JefferyC.Sellers,ZhiQ.Huang,WilliamE.Grizzle,CecilR.Stockard,KevinT.Nash,DonaldJ.Buchsbaum.ClinicalExperimentalMetastasis.(8)
[2]Kisspeptin-10inhibitsbone-directedmigrationofGPR54-positivebreastcancercells:Evidenceforadose–windoweffect[J].TeresaOlbrich,ElkeZiegler,GregorTürk,AntjeSchubert,GünterEmons,CarstenGründker.GynecologicOncology.
[3]Kisspeptinisreleasedfromhumanprostatecancercelllinesbutplasmakisspeptinisnotelevatedinpatientswithprostatecancer[J].AnnetteCurtis,KevinMurphy,OwaisChaudhri,RadhaRamachandran,Anna-MaryYoung,JonathanWaxman,GurjinderNijher,GavinBewick,MohammedGhatei,StephenBloom,WaljitDhillo.OncologyReports.(6)
[4]Makinggenetherapyforosteosar