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检测微小RNA--5p(miR--5p)在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖能力的影响，并探讨其调节机制。方法实时定量聚合酶链反应(PCR)法用来检测骨肉瘤组织、瘤旁组织及骨肉瘤细胞株中miR--5p的表达量。细胞计数试剂盒(CCK-8)法及Westernblot分别用来研究miR--5p对骨肉瘤细胞增殖能力的影响及探讨miR--5p调节骨肉瘤细胞增殖的相关机制。结果在骨肉瘤组织中，miR--5p表达量显著升高(肉瘤旁组织中表达量为0.34±0.09，而骨肉瘤组织中的表达量为1.47±0.18，P＝0.)；此外，miR--5p在骨肉瘤细胞株HoS、MG-63及Hu09中的水平(分别为1.65±0.03、1.13±0.11、1.87±0.14)显著高于其在人骨髓间充质干细胞hMSCs中的水平(0.56±0.19，P＝0.)；CCK-8实验结果表明，与空白及阴性对照组比较，在转染miR--5pmimics后48、72、96h，MG-63细胞的增殖能力明显增强(P＝0.)；流式细胞术检测细胞凋亡的结果表明，过表达miR--5p组内MG-63细胞的凋亡率为(0.87±0.19)%，显著低于空白组及阴性对照组内细胞的凋亡率[分别为(5.49±0.53)%、(6.72±0.85)%，P＝0.]；此外，我们通过靶基因预测软件、结合RT-qPCT及Westernblot结果初步认为miR--5p可通过转录后调节程序性细胞死亡因子4(PDCD4)的表达而发挥上述促癌效应。结论miR--5p在骨肉瘤组织中高表达且其在体外可促进骨肉瘤细胞的增殖。

目的观察降钙素相关基因肽(CGRP)对骨质疏松大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化能力的影响，探讨其促进骨质疏松性骨折愈合的细胞/分子作用机制。方法3个月龄SD大鼠，行双侧卵巢切除术，术后常规喂养，术后6个月用显微CT(Micro-CT)行骨密度检测，确定骨质疏松模型建立成功；处死骨质疏松大鼠，采用全血贴壁法分离BMSCs，用流式细胞仪进行鉴定；以培养基中加入不同浓度(10－7～10－10mol/L)的CGRP建立实验组，用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力；碱性磷酸酶(ALP)活性检测及茜素红染色法观察CGRP对骨质疏松大鼠BMSCs成骨分化及细胞外基质矿化能力的影响；采用反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ALP、Ⅰ型胶原蛋白(COLL-1)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨粘连蛋白(Osteonectin)、Run家族转录因子(RunX2)等成骨相关细胞基因mRNA的表达；使用Westernblot分析来检测RunX2及Osteonectin的蛋白含量。结果成功分离培养出骨质疏松大鼠BMSCs；CCK-8法测定细胞增殖能力，CGRP各浓度组较对照组均增加，且呈剂量依赖关系，7d时对照组吸光度(A)值为0.±0.，CGRP组中10－7mol/L为0.±0.(P＝0.)，10－8mol/L为0.±0.(P＝0.)，10－9mol/L为0.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为0.±0.(P＝0.)，差异有统计学意义；ALP活性测定结果显示，各CGRP组较对照组ALP活性均增高，14d时对照组为4.±0.，CGRP组中10－7mol/L为44.±2.(P＝0.)，10－8mol/L为42.±2.(P＝0.)，10－9mol/L为39.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为24.±1.(P＝0.)[单位：10－3μmol/(min·mg)]，差异有统计学意义；钙结节染色均呈阳性，而对照组无显色；基因检测结果提示，各CGRP组的基因表达较对照组升高，7d时ALP空白组为0.±0.，10－7mol/L为2.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为2.±0.(P＝0.)；BMP-2空白组为0.±0.2，10－7mol/L为3.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为2.±0.(P＝0.)；COLL-I空白组为1.±0.，10－7mol/L为2.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为2.±0.(P＝0.)；RunX2空白组为0.±0.，10－7mol/L为2.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为2.±0.(P＝0.)；Osteonectin空白组为1.±0.2，10－7mol/L为1.±0.(P＝0.)，10－10mol/L为1.±0.(P＝0.)，差异有统计学意义；蛋白检测结果提示各CGRP组的RunX2及Osteonectin蛋白表达较对照组均升高。结论适当浓度(10－7～10－10mol/L)的CGRP可以促进骨质疏松大鼠BMSCs的增殖，呈浓度依赖性，同时可提高其成骨分化能力，CGRP可能在治疗骨质疏松骨折的骨修复中发挥重要作用。