来自人骨髓间充质干细胞的外泌体通过Hed [复制链接]

间充质干/基质细胞（MSCs）是已知的肿瘤微环境场所的起源。MSCs参与肿瘤微环境的形成和与肿瘤细胞的相互作用。但是，MSCs对肿瘤细胞生长的潜在功能影响的有争议。这里，我们从骨髓MSC来源外泌体的角度来研究MSCs对人骨肉瘤和胃癌细胞生长的分子机制。

在这项研究中，我们发现源自人骨髓MSCs的外泌体通过激活Hedgehog信号通路促进骨肉瘤（MG63）和胃癌（SGC）细胞的生长。抑制Hedgehog信号通路能显著抑制hBMSC来源的外泌体对肿瘤生长的过程。

图1显示了人骨髓间充质干细胞的表征。A图是人骨髓来源的MSC在光学显微镜下呈现的成纤维样，纺锤体形的形态。B图通过FACS分析检测到人骨髓来源的MSC表型，显示了CD29，CD44和CD标记物的阳性表达和CD45和HLA-DR标记物的阴性表达。

图2显示了人类骨髓间充质干细胞分泌的外泌体的鉴定和表征。A图通过透射电子显微镜图像揭示了MSC来源的外泌体是典型的小圆纳米颗粒，其直径范围为40至80nm，比例尺表示nm。B图为WB检测hBMSC外泌体中Hsp70andCD63的表达情况。（Hsp70andCD63是胞外表面标记）

Fig.3.UptakeofhBMSC-exosomesbyMG63andSGCcells.MSC-derivedexosomeswerelabeledwithPKH26(red)for4minutesatroomtemperature(B,H),exosomefreesupernatantwasalsodyedbyPKH26asanegativecontrol(E,K).MG63andSGCcellswereincubatedwithabsence(control)orpresenceoflabeledexosomesfor24hours,MG63andSGCcellswerestainedusingDAPI(A,D,G,J).PKH26-labelledexosomeshavebeeninternalizedbyMG63andSGCcellsimagingwithconfocalfluorescencemicroscopy(originalmagnification,×)(C,I).

图三证明了MSC来源的外泌体会被MG63和SGC细胞摄入。

图4显示了hBMSC来源的外泌体能促进MG63和SGC细胞的存活和增殖。A图和B图通过transwellinvasionassay和scratchassay证明了hBMSC来源的外泌体可以促进MG63和SGC细胞的迁移能力。C图和D图通过CCK-8assay证明了hBMSC来源的外泌体能增强MG63andSGC细胞的增殖能力，但在GANT-61的处理组中该增强作用被抑制了。这说明hBMSC来源的外泌体对MG63和SGC细胞的促生长作用是通过Hedgehog信号通路实现的。（GANT-61是Hedgehog信号通路中相关蛋白的转录因子的拮抗剂）

图5显示了hBMSC来源的外泌体诱导MG63和SGC细胞中Hedgehog信号通路的激活。

A图通过Westernblotanalysis显示：由于hBMSC来源的外泌体的作用，Hedgehog信号通路的分子Gli1,Patched-1,Shh和Smoothened的表达水平发生了上调，该促进作用会被GANT-61抑制。B图通过real-timePCR技术显示：Gli1,Patched-1,Shh和Smoothened的转录水平也发生了上调，并且该促进作用也会GANT-61抑制。

结论：我们的发现阐明了hedgehog信号通路在hBMSCs来源的外泌体中诱导肿瘤进展的新角色。

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